二、培养基母液
母液（stock solution）即贮备液，是欲配制溶液的浓缩液。
（一）母液的配制
在组培中，配制培养基是经常性的工作，同时也较为繁琐。比如，每种培养基配制所需药品大多在20种左右，若每次制作都称量二十几次，非常浪费时间和精力，而且有些药品用量非常少，如每升MS培养基只需0.025mg的CuSO4μ5H2O，即使是万分之一电子天平也不可能称量那么小的单位。因此，为节省时间、精力和保证准确，我们将各种药品浓缩成一定倍数的母液，然后再保存使用。一般母液的浓度要比实际所需的浓度高出10～100倍。
母液需用蒸馏水配制，药品应选用纯度较高的化学纯CP（三级）或分析纯AR（二级）等级，以免有杂质对培养物造成不利影响。药品的称量及定容都要准确，并使用不同的药匙进行称量，以免药品交叉混杂，而且每称好一种药品要作一记号，防止重复称量。根据培养基所含的成分，配制母液包括以下操作，可结合表2-3-1所示的MS培养基母液配方一同学习。
1.大量元素母液配制
配制大量元素母液时，应注意避免混合各种盐类产生沉淀，为此各种药品必须单独充分溶解后再混合。同时还要注意各个药品溶液加入的先后次序，比如要将Ca2+、Ba2+和SO42-、PO43-错开，以免结合生成CaSO4、BaSO4、Ca3（PO4）2沉淀。另外，在混合各种盐类时，要慢慢地混合，并一边混合一边搅拌。
2.微量元素母液配制
由于微量元素的用量较少，故称量时务必要准确。而且同大量元素母液一样，也要注意各个药品溶液的添加顺序，以免产生沉淀。
3.铁盐母液配制
铁盐容易发生沉淀，需要单独配制。一般用FeSO4μ7H2O和Na2EDTA配成铁盐螯合剂比较稳定，不易沉淀。此外，铁盐要放在棕色瓶中保存，这样能避免阳光照射分解。
4.植物生长调节剂母液配制
每种植物生长调节剂必须单独配成母液，浓度一般为0.5～1.0mg/mL，因为用量较少，一次可配成50ml或100ml。多数植物生长调节剂难溶于水，需要先用其他溶剂助溶，然后再加水定容。比如，IAA、IBA、GA等先溶于少量的95%酒精中，再加水定容；NAA先溶于少量热水或95%酒精中，再加水定容；2，4-D先用少量0.1mol/L的NaOH溶解，再加水定容；KT和6-BA先溶于少量0.1mol/L的HCl，再加水定容；ZT先溶于少量95%酒精，再加热水定容。
（二）母液的保存
将配制好的母液倒入广口瓶中，并在瓶上贴上标签，注明名称（或编号）、倍数、配制日期、配制人以及配制1L培养基时的用量等内容，以便配制培养基时能够快速、准确量取。将母液放置在2～4℃冰箱中保存，但不可久置，应尽快用完。
（三）母液的用量
培养基母液与植物生长调节剂母液用量的计算公式如下：
【任务实施】
一、学生分组，每组4～6人。
二、每个小组分别配制MS培养基母液。
（一）大量元素母液（1～3号）的配制
1.称量找齐药品，用百分之一电子天平称取药品。
2.溶解将各个药品分别添加少量蒸馏水后，用磁力搅拌器搅拌，溶解、混合。
3.定容1号母液定容至1000mL，2、3号母液定容至500mL，然后分别倒入广口瓶。
（二）铁盐母液（4号）的配制
1.称量找齐药品，用万分之一电子天平称取药品。
2.溶解用少量80℃以上的热水溶解Na2EDTA，少量蒸馏水溶解FeSO4μ7H2O，然后将FeSO4μ7H2O溶液缓缓倒入Na2EDTA溶液中，一边倒一边搅拌使其充分螯合。
3.定容加蒸馏水定容至500mL，然后倒入广口瓶。
（三）微量元素母液（5号）的配制
1.称量找齐药品，用万分之一电子天平称取药品。
2.溶解将各个药品分别添加少量蒸馏水后，溶解、混合。
3.定容加蒸馏水定容至1000mL，然后倒入广口瓶。
（四）有机物母液（6号）的配制
1.称量找齐药品，用万分之一电子天平称取药品。
2.溶解将各个药品分别添加少量蒸馏水后，溶解、混合。
3.定容加蒸馏水定容至500mL，然后倒入广口瓶。
三、在各个广口瓶上贴上标签，注明母液名称（或编号）、倍数、配制日期、配制人以及配制1L培养基时的用量等内容，然后放入2～4℃冰箱中保存。
【知识拓展】
一般来说组培常用的药品应选用分析纯，但生产上为了降低成本也可使用化学纯，不过试验研究最好选用分析纯，可提高成功率。
任务四培养基的配制
【任务目标】
1.掌握常用的培养基类型及其配方。
2.掌握配制培养基的方法。
3.了解培养基选择实验方法。
【任务设置】
配制MS培养基。
【相关知识】
根据不同的植物、培养部位以及培养目的，需要选择不同的培养基，下面为大家介绍一些常用的且具有代表性的培养基类型、配方以及制备方法。
一、常用培养基简介
目前国际上流行的培养基有几十种，如MS、White、N6、B5、Miller、KM-8P、SH、LS、Nitsch、WPM、Heller等。这里着重介绍其中的六种培养基。
（一）MS培养基
1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的培养基。特点是无机盐浓度高（钾盐、铁盐、硝酸盐均较高）；元素比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性；营养丰富，元素种类齐全，使用广泛。适用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养，效果良好。
（二）White培养基
1934年由White为培养番茄根尖而设计的培养基，1943年随其专着出版而问世。特点是无机盐浓度低；有机成分含量也相对较低。适用于生根培养、胚胎培养等。
（三）B5培养基
1968年由Gamborg等为培养大豆根细胞而设计的培养基。特点是含有较高含量的硝酸盐、VB1；含有较低含量的铵盐。适用于双子叶植物特别是木本植物的组织培养。
（四）N6培养基
1975年由我国学者朱至清等为培养水稻花药而设计的培养基。特点是成分较简单；KNO3和（NH4）2SO4含量高；不含钼。适用于小麦、水稻等禾本科植物的花药培养。
（五）Miller培养基
该培养基的特点是大量元素减为MS的一半左右，微量元素种类也相应减少。适用于大豆愈伤组织和花药培养。
（六）KM-8P培养基
1974年为培养原生质体而设计的培养基。特点是有机成分较复杂，包括了所有的单糖和维生素。广泛用于原生质体培养，包括原生质体融合的培养。
二、几种常用培养基配方
（一）White培养基
（二）B5培养基
（三）N6培养基
（四）Miller培养基
（五）KM-8P培养基
三、培养基配制方法
虽然不同类型的培养基有各自的配方，但配制过程是大致相似的，均分为称量、溶解、定容、调pH、分装、封口、灭菌和摆平面（或斜面）等步骤。
（一）称量
根据选定的培养基配方、母液的浓缩倍数以及要配制的培养基体积，称取所需母液、蔗糖和琼脂。这里要注意，如果用移液管吸取母液，那么移液管必须与每瓶母液一一对应，切忌只用1支移液管取完所有母液，这样会使母液掺入杂液，导致不纯。对用量较少的生长剂类药液，可使用移液枪吸取，但每次吸取不同的药液时必须更换枪头。
（二）溶解
取适量蒸馏水放入加热容器中，体积约为欲配制培养基体积的2/3～3/4。倒入称取的母液和蔗糖，边加热边搅拌，溶解完全后，再倒入称好的琼脂，也是边加热边搅拌直至溶解完全。
（三）定容
用蒸馏水定容至所需体积，然后再略搅拌几下，使培养基均匀，关火。
（四）调pH
用0.1mol/L的NaOH或HCl溶液调节培养基的酸碱度，使pH值维持在5.8～6.0。加入NaOH或HCl溶液后一定要搅拌均匀再检测pH值，以防止培养基局部pH值过高或过低。
（五）分装
配制好的培养基要趁热分装，因为琼脂在40℃左右时就会凝固。分装的方法有虹吸式分注法、滴定法及烧杯直接分注法三种。一般100mL的容器约装入30～40mL培养基，即1L培养基约分装30瓶左右；若是分装在试管中，则以试管体积的1/5～1/3为宜。太多会浪费培养基，而太少会不易接种和影响生长。注意分装时不要把培养基弄到瓶口，以免日后污染。
（六）封口
分装好的培养基应及时用封口膜包上瓶口。封口处要松紧适度，系活扣，以便接种操作。如有不同的处理，扎口后应注明培养基种类，做好标记。
（七）灭菌
封口后的培养基最好立即灭菌，若因故不能及时灭菌，应放入冰箱中保存，在24h内完成灭菌。具体的操作步骤将在任务五中详细介绍。
（八）摆平面（或斜面）
灭菌后的培养基应趁热根据需要选择保持平面或放置斜面使其冷却。暂时不用的培养基最好储藏于4～10℃的条件下，但放置时间不易太长，时间过长易造成潜在的污染，特别是含IAA或GA的培养基应在一周内用完，其他的培养基也不要超过一个月。
【任务实施】
一、学生分组，每组4～6人。
二、每个小组制备1L的MS培养基。
（一）称量称取MS培养基母液和6g琼脂、30g蔗糖。
（二）溶解向锅内倒入700～800mL蒸馏水，再放入蔗糖、母液，边加热边搅拌，溶解完全后，再加入琼脂，也是边加热边搅拌直至完全熔化。
（三）定容加入蒸馏水将培养基定容至1L，再搅拌几下，关火。
（四）调pH使用酸度计或精密pH试纸测定培养基pH值，若pH值不在5.8～6.0范围内，用1mol/L的NaOH或HCl溶液将pH值调至适值。
（五）分装将配制好的培养基趁热分装到三角瓶中，厚度约1cm左右。
（六）封口用封口膜包扎瓶口，然后标明培养基种类，做好标记。
【知识拓展】
培养基的种类，根据态相可分为固体培养基和液体培养基；根据培养过程可分为初代培养基和继代培养基；根据作用可分为诱导培养基、增殖培养基和生根培养基；根据营养水平可分为基本培养基和完全培养基等。那么，该如何从众多培养基中选择到合适的呢？下面为大家详细介绍。
一、培养基的选择
首先由一种已知且广泛使用的基本培养基开始，如MS，通过一系列的试验研究，对这种培养基做一些定性和定量的变动之后，进而筛选得到满足培养所需的最佳培养基。
（一）培养基的选择过程
培养基的筛选工作通常分为以下三个步骤。
1.准备工作
对某种植物进行组培之前，需要查阅相关文献来了解培养对象的信息，如杂志、报纸、互联网、电视等。若查找文献不方便，还可通过参观组培工厂或科研机构，来向专业人士请教。
